外泌体大规模提取的秘密都在这了

 
点击 65回复 0 原帖 09-05 12:07 IP属地 江苏南京

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为什么要做大规模提取?

1)节省成本:Umibio大规模提取,同比试剂盒等方法提取节省人力成本,物力成本等50%以上,而且体积越大,成本优势越高;

2)提高效率:传统方法每个批次一般不会超过300ml,而大规模提取可以达数十升,一天内完成,以10L为例,时间可以压缩90%,甚至更多;

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3)方便质控:每个批次通过连续进样,最终出来的成品,通过一次的提取,不用担心每个批次提取的差异过大,数据更稳定,有说服力;

4)纯度飞跃:通过大规模提取工艺,可以大量的去除杂质,优化后纯度远远比常规试剂盒提取高,更好的保留外泌体的活性和形态;

大规模提取是有参考的解决方案的,这两篇文献很好的做了阐释。

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关键步骤[1]:

● 收集条件培养基(CM):收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基,经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。

● 处理大体积培养基:对于大体积培养基(50 ml 至 200 mL),使用切向流过滤(TFF)系统进行浓缩和透析,然后加载到结合-洗脱分子筛层析(BE-SEC)柱上进行纯化。

● 分离 EVs:根据 280 nm 紫外吸收色谱图收集外泌体样品,浓缩后储存用于下游分析。

规模:

该方法能够从较大体积的培养基中纯化外泌体,通过使用不同滤膜(100 kDa 和 300 kDa)的 TFF 系统进行浓缩和透析,然后通过 BE L-SEC 柱净化,可保留大部分囊泡并提高纯度,适用于大规模外泌体纯化。

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关键步骤[2]:

● 制备培养上清液:从小鼠脾细胞中获得小鼠 CTLs(CD8+T 细胞)和 T 辅助细胞(CD4+T 细胞),培养人 PBMCs、NK-92 细胞、Jurkat 6E-1 细胞和非贴壁 HEK293.2sus 细胞,收集培养上清液并过滤去除细胞和碎片。

● 超滤:使用 TFF 系统和 mPES MidiKros Filter Modules 对培养上清液进行超滤,浓缩并替换为 PBS。

● 阴离子交换柱色谱:将超滤浓缩的 EVs 加载到阴离子交换柱上,用 NaCl 线性梯度(0.15 M 至 0.8 M)或分步方法(0.3 M 和 0.5 M NaCl)洗脱,收集不同盐浓度下的洗脱组分。

规模:

通过该方法可从 4 L 培养上清液中制备外泌体,且能够有效分离生物活性外泌体和微泡样的外泌体,适用于大规模制备。

大规模提取有没有难度?

1)从基本操作上没有难度,每一步按部就班即可;

2)从经验和提取摸索角度,需要有大量的操作经验作为支持;

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大规模提取全流程是什么样子的?

1) 样本准备;

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2) 样本预处理;

3) 连续进样浓缩;

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4) 提取纯化;

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5) 抽样检测质控;

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6) 无菌分装;

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大规模提取外泌体产品应用:

1)肿瘤治疗:外泌体作为药物载体:科学家们正在设计工程化外泌体,通过工程化赋能,外泌体可以实现更高效、更安全的药物递送。

2)外泌体作为生物标志物:外泌体携带的内容物能够反映亲本细胞的生理病理特征,因此具有作为癌症早期诊断标志物的潜力。

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3)免疫调节:外泌体在自身免疫性疾病中的应用:间充质干细胞外泌体(MSC-Exos)显示出强大的免疫调节和抗炎作用。

4)组织修复与再生:外泌体在组织修复中的作用:外泌体通过传递生长因子、细胞因子等活性物质,促进细胞增殖、分化和血管生成,从而在组织修复和再生中发挥重要作用。

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5)工程化外泌体:为了提高外泌体的精准靶向递送和载药物能力,科学家们正在开发工程化外泌体。这些工程化外泌体通过基因编辑、表面修饰等手段,实现对外泌体功能和特性的精确调控。

Umibio目前有哪些服务与产品?

1)大规模提取服务:根据量的大小,执行梯度价格,帮您节省成本,快速获取外泌体;

2)人源外泌体:MSC,NK等细胞外泌体;

3)动物源外泌体:牛奶外泌体;

4)植物源外泌体:葡萄外泌体,姜黄外泌体;

参考文献:

[1] Corso G, Mäger I, Lee Y, Görgens A, Bultema J, Giebel B, Wood MJA, Nordin JZ, Andaloussi SE. Reproducible and scalable purification of extracellular vesicles using combined bind-elute and size exclusion chromatography. Sci Rep. 2017 Sep 14;7(1):11561.

[2] Seo N, Nakamura J, Kaneda T, Tateno H, Shimoda A, Ichiki T, Furukawa K, Hirabayashi J, Akiyoshi K, Shiku H. Distinguishing functional exosomes and other extracellular vesicles as a nucleic acid cargo by the anion-exchange method. J Extracell Vesicles.


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